针对上述问题，上海交通大学杨雯隽、复旦大学丁琛、新疆医科大学郭文佳团队首次鉴定出转录因子TEAD1是外泌体生物发生和分泌的新型调控因子，揭示其作为"分子开关"通过上调RAB11、CD9和SNAP23等外泌体分泌关键蛋白的表达，显著促进多种细胞类型外泌体的合成与释放。研究进一步验证了TEAD1在再生医学中的治疗应用价值：在脂肪来源干细胞（ADSCs）中过表达TEAD1可增强外泌体分泌，显著促进糖尿病小鼠的皮肤创面愈合；在骨髓来源干细胞（BMSCs）中过表达TEAD1则能增强外泌体分泌并促进脊髓损伤修复。研究团队采用腺相关病毒（AAV）介导的TEAD1局部原位递送策略，实现了体内外泌体的持续高效分泌与组织修复。该研究不仅阐明了TEAD1调控外泌体生物发生的分子机制，更为解决外泌体量产难题提供了创新方案，为慢性伤口、神经损伤及其他需要组织再生修复的疾病开辟了基于TEAD1调控的外泌体治疗新途径。该文章于2026年3月12日以《TEAD1 Enhances Exosome Secretion and Promotes Exosome-Mediated Tissue Regeneration》为题发表于《Advanced Science》（DOI：10.1002/advs.202514104）。

（1）TF活性谱揭示TEADs是调控外泌体分泌的关键TF

通过连续心内注射A549肺癌细胞并在脑转移灶建立后（4-8周）手术切除、体外培养，逐代筛选获得G1至G4细胞系，G4代表最高转移潜能（图1A）。TEM和NTA结果显示各代细胞外泌体粒径无显著差异，但分泌量随转移潜能增强而递增：G3约为G0的1.5倍，G4约为G0的2.1倍（图1B, C）。Transwell实验显示G0细胞经G4来源外泌体处理24小时后迁移能力显著高于G0来源外泌体处理组，提示G4细胞外泌体具有促进肿瘤转移的功能，且该效应独立于受体细胞本身的转移潜能。

TFRE蛋白质组学技术分析G0、G3和G4肺癌细胞的转录因子活性谱，发现G3和G4组分别较G0组有22个和43个转录因子显著上调，其中8个转录因子在两组共同上调，包括TEAD家族成员TEAD1、TEAD2、TEAD3和TEAD4，且TEAD1在G4细胞中上调最为显著（图1D-G）。在H1299和A549肺癌细胞中，TEAD1过表达显著增加外泌体分泌，敲低则显著减少（图1H-K）；该效应在HepG2肝癌细胞和BGC-823胃癌细胞中得到验证（图1H, I, L, M）。在A549细胞中，TEAD2、TEAD3和TEAD4过表达均可促进外泌体分泌，但TEAD1过表达组的外泌体水平分别至少为TEAD2、TEAD3和TEAD4过表达组的3.2倍、2.4倍和2.7倍。TFRE活性分析显示STAT家族成员（STAT1、STAT3、STAT6）、NFκB和c-MYC在三代细胞间活性无显著变化；功能验证表明仅STAT1过表达对外泌体分泌有轻微促进作用，JUND、MYC、P65、STAT3和STAT6过表达未引起可检测变化。

蛋白质组学分析显示YAP/TAZ抑制剂CA3处理及YAP敲低均降低G0和G4细胞中YAP和TEAD1蛋白水平，并显著减少外泌体分泌，但不影响外泌体形态和粒径（图1O）。在H1299细胞中，YAP过表达增加TEAD1表达和外泌体分泌，YAP敲低则减少；在sh-YAP细胞中重新过表达TEAD1可挽救外泌体分泌的降低（图1P）。

图1. TEAD家族分子调控外泌体的合成与分泌。（A）构建不同转移潜能的肺癌细胞系（G0为低转移细胞系，G4为高转移细胞系）；（B）细胞培养上清中外泌体的透射电镜图像，比例尺=200 nm；（C）外泌体粒径分布和浓度的纳米颗粒追踪分析（n=3，mean ± SD）；（D）不同恶性程度肺癌细胞系转录因子活性蛋白质组学工作流程；（E）不同恶性程度肺癌细胞系转录因子活性比较，红色表示上调转录因子，蓝色表示下调转录因子；（F）G3和G4细胞系上调转录因子的重叠分析；（G）G3和G4细胞中8个上调转录因子的活性分布；（H）四种不同肿瘤细胞系中TEAD1过表达和敲低的Western blot验证（n=3，mean ± SD）；（I）四种不同细胞系TEAD1敲低和过表达后外泌体的透射电镜图像，比例尺=50 nm；（J-M）四种不同细胞系TEAD1敲低和过表达后外泌体粒径和颗粒数的统计（n=3，mean ± SD）；（N）H1299细胞系MST1/2敲低或过表达后外泌体粒径和颗粒数的统计（n=3，mean ± SD）；（O）G0和G4细胞系CA3处理或YAP敲低后外泌体粒径和颗粒数的统计（n=3，mean ± SD）；（P）sh-YAP H1299细胞系中TEAD1过表达后外泌体粒径和颗粒数的统计（n=3，mean ± SD）。

（2）TEAD1通过直接结合RAB11、CD9和SNAP23的启动子来增强外泌体分泌

为探究TEAD1促进肺癌细胞外泌体分泌的分子机制，对对照组、OE-TEAD1 H1299和OE-TEAD1 A549细胞进行蛋白质组学分析（图2A）。结果显示两细胞系分别有652和653个蛋白上调（图2B），H1299中上调蛋白显著富集于ESCRT和网格蛋白介导内吞通路，A549中则主要富集于反式高尔基网络囊泡出芽和高尔基体相关囊泡生物发生通路，两细胞系均在网格蛋白介导内吞的货物识别、膜运输和囊泡介导转运通路中显著富集（图2C）。共同上调的210个蛋白中，外泌体合成与分泌相关蛋白CHMP4B、CD9、STX7、VTI1B、STX12、CHMP5，SNAP家族成员（SNAP23、SNAP25、SNAP29）及RAB家族成员（RAB1A、RAB3GAP2、RAB13、RAB9A、RAB9B、RAB27A、RABGGTB、RAB11A、RAB11B）均显著上调，其中RAB11、CD9和SNAP23上调尤为显著（图2D-F）。ChIP-seq显示TEAD1在RAB11、CD9和SNAP23基因启动子区域高度富集（图2G, H），靶基因通路富集于质膜和囊泡介导运输通路（图2I）。生物信息学分析表明上述基因启动子区域均含有保守的TEAD/MCAT基序（图2J）。荧光素酶报告基因实验证实TEAD1显著增强RAB11、CD9和SNAP23的转录活性，YAP过表达增强该效应，YAP敲低则抑制，MCAT基序突变基本消除TEAD1驱动的转录激活（图2K）。功能验证显示敲低RAB11、CD9或SNAP23均可几乎完全逆转TEAD1过表达引起的外泌体分泌增加，敲低CTGF或ANKRD1则无影响（图2L, M）。上述结果证实，TEAD1主要通过转录激活RAB11、CD9和SNAP23促进外泌体分泌（图2N）。

图2.TEAD1过表达对肺癌细胞系及外泌体相关效应的蛋白质组学分析。（A）基于H1299和A549细胞系的蛋白质组学研究框架；（B）H1299细胞系TEAD1过表达后的蛋白丰度变化，红色表示上调蛋白，蓝色表示下调蛋白；（C）H1299细胞TEAD1过表达后上调的信号通路；（D）H1299和A549细胞系TEAD1过表达后上调蛋白的重叠分析；（E）TEAD1过表达后调控外泌体合成和分泌的9个蛋白丰度倍数变化（n=3）；（F）RAB香叶基香叶基化相关蛋白-蛋白相互作用网络；（G,H）染色质免疫沉淀-定量聚合酶链反应（G）和染色质免疫沉淀测序（H）显示TEAD1与RAB11、CD9、SNAP23、CTGF和ANKRD1启动子的结合（n=3，mean ± SD）；（I）TEAD1靶基因的通路富集分析；（J）野生型或MCAT元件突变的人RAB11、CD9、SNAP23、CTGF和ANKRD1启动子驱动的荧光素酶报告基因构建示意图；（K）OE-TEAD1 H1299细胞转染RAB11、CD9、SNAP23、CTGF和ANKRD1过表达载体或空载体对照的荧光素酶报告基因实验（n=3，mean ± SD）；（L）OE-TEAD1 H1299细胞系中RAB11、CD9、SNAP23、CTGF和ANKRD1敲低后外泌体的透射电镜图像，比例尺=50 nm；（M）OE-TEAD1 H1299细胞系中RAB11、CD9、SNAP23、CTGF和ANKRD1敲低后外泌体粒径和颗粒数的统计（n=3，mean ± SD）；（N）TEAD1促进外泌体合成和分泌的机制模型。

（3）TEAD1介导的外泌体分泌增强促进HaCaT细胞增殖和HUVECs血管生成

间充质干细胞来源外泌体在组织修复和再生医学中发挥关键作用。为探究TEAD1介导的外泌体产量增加是否贡献于修复功能，建立OE-TEAD1和sh-TEAD1 ADSC细胞系，分离并鉴定其外泌体（图3A, B）。定量分析显示，OE-TEAD1显著增加ADSC-Exos分泌，sh-TEAD1则显著减少（图3C）。对对照组和OE-TEAD1 ADSC细胞系进行蛋白质组学分析，OE-TEAD1组上调蛋白主要富集于PPAR信号通路、细胞外泌体、含胶原细胞外基质、皮肤表皮结构成分、细胞骨架及细胞外空间等通路（图3D-F）。外泌体蛋白质组学分析显示，583个鉴定蛋白中仅39个（6.7%）差异表达，其中RAB11、CD9和SNAP23显著上调，整体外泌体蛋白组成未发生广泛改变（图3G-I）。体外功能实验表明，OE-TEAD1 ADSC-Exos显著促进HaCaT细胞增殖、迁移及创面愈合，并增强HUVEC血管形成能力；sh-TEAD1 ADSC-Exos则无上述促进作用（图3J-O）。对接受外泌体处理的HaCaT细胞和HUVECs进行蛋白质组学分析，OE-TEAD1 ADSC-Exos处理组HaCaT细胞上调蛋白富集于细胞增殖、层粘连蛋白结合及细胞黏附通路（图3P, Q）；HUVECs上调蛋白则富集于细胞周期调控、细胞分裂及细胞黏附通路（图3R, S）。上述结果表明，TEAD1通过增强ADSC-Exos分泌并调控其生物活性，促进创面愈合和血管生成所需的细胞增殖、迁移及黏附等关键过程。

图3. TEAD1介导的外泌体分泌增强促进HaCaT细胞增殖和HUVEC血管生成。（A）评估ADSCs中TEAD1调控外泌体效应的实验设计；（B）ADSCs中TEAD1敲低和过表达后外泌体的透射电镜图像，比例尺=50 nm；（C）ADSCs中TEAD1敲低和过表达后外泌体粒径和颗粒数的统计（n=3，mean ± SD）；（D）ADSCs TEAD1过表达后的差异蛋白表达，红色表示上调蛋白，蓝色表示下调蛋白；（E）ADSCs TEAD1过表达后上调的信号通路；（F）OE-TEAD1和OE-Ctrl组差异表达蛋白热图，展示胶原细胞外基质、细胞外空间、细胞骨架、PPAR信号通路和细胞外泌体相关蛋白的表达（n=3）；（G）OE-TEAD1和OE-Ctrl组ADSCs来源外泌体的差异蛋白表达，红色表示上调蛋白，蓝色表示下调蛋白；（H）OE-TEAD1 ADSCs来源外泌体中上调的信号通路；（I）OE-TEAD1和OE-Ctrl组ADSCs来源外泌体差异表达蛋白热图，展示细胞外空间和血小板活化相关蛋白的表达（n=4）；（J,K）不同来源外泌体处理HaCaT细胞（J）和HUVECs（K）的增殖实验结果（n=3，mean ± SD）；（L,M）不同来源外泌体处理HaCaT细胞的划痕实验结果，比例尺=200 µm（n=3，mean ± SD）；（N）Transwell实验显示不同来源外泌体对HaCaT细胞迁移的影响（n=3，mean ± SD）；（O）HUVECs管形成实验显示细胞毛细血管网络形成，比例尺=100 µm（n=3，mean ± SD）；（P）OE-TEAD1 ADSCs和OE-Ctrl ADSCs来源外泌体处理的受体细胞（HaCaT）差异蛋白表达，红色表示上调蛋白，蓝色表示下调蛋白；（Q）OE-TEAD1 ADSCs来源外泌体处理的受体细胞（HaCaT）中上调的信号通路；（R）OE-TEAD1 ADSCs和OE-Ctrl ADSCs来源外泌体处理的受体细胞（HUVECs）差异蛋白表达，红色表示上调蛋白，蓝色表示下调蛋白；（S）OE-TEAD1 ADSCs来源外泌体处理的受体细胞（HUVECs）中上调的信号通路。

（4）腺相关病毒介导的TEAD1（TEAD1-AAV）基因疗法通过促进外泌体分泌增强皮肤伤口愈合

在BALB/c小鼠10 mm全层皮肤缺损模型中，随机分为TEAD1-AAV、Ctrl-AAV、TEAD1-AAV+GW4869和Ctrl-AAV+GW4869四组（图4A）。IF、IHC及Western blot证实TEAD1-AAV组创面TEAD1成功过表达，MSC标志物CD90上调；GW4869显著减少外泌体标志物CD9丰度（图4D,E）。创面愈合评估显示，第7天TEAD1-AAV组闭合率达68.26 ± 2.9%，显著高于Ctrl-AAV组（21.5 ± 1.9%）和Ctrl-AAV+GW4869组（14.3 ± 1.9%），TEAD1-AAV+GW4869组降至21.5 ± 3.3%；第10天TEAD1-AAV组闭合率达88.31 ± 2.4%，显著高于Ctrl-AAV组（66.49 ± 3.0%）和TEAD1-AAV+GW4869组（58.49 ± 2.9%）（图4B,C）。IHC显示TEAD1-AAV组CD63、CD31和Ki67显著上调，IL-6显著降低；TEAD1-AAV+GW4869组上述标志物显著下调，IL-6升高（图4E）。蛋白质组学分析显示TEAD1-AAV组有417个上调蛋白和29个下调蛋白，上调蛋白主要富集于血小板活化、ECM-受体相互作用、PI3K-Akt信号通路、细胞周期及细胞外泌体等通路（图4F）。上述结果表明，TEAD1通过促进外泌体分泌、增强细胞增殖和血管生成、抑制炎症反应加速创面愈合，且该效应依赖于外泌体分泌。

图4. TEAD1-AAV基因治疗通过促进外泌体分泌增强皮肤创面愈合。（A）BALB/c小鼠10 mm全层皮肤缺损模型建立及相应蛋白质组学分析；（B,C）不同处理组小鼠创面愈合过程图像（n=5，mean ± SD）；（D）IF评估Ctrl-AAV、Ctrl-AAV+GW4869、TEAD1-AAV和TEAD1-AAV+GW4869处理组第14天创面样本中TEAD1、CD90和CD9的表达，比例尺=200 µm；（E）IHC评估上述四组第14天创面样本中TEAD1、CD63、CD31、Ki67和IL-6的表达，比例尺=100 µm（n=3，mean ± SD）；（F）TEAD1-AAV组上调的信号通路。

（5）TEAD1-AAV通过增强外泌体分泌逆转1型和2型糖尿病患者的慢性伤口

在T1DM小鼠创面模型中，TEAD1-AAV处理后IF和IHC证实TEAD1成功过表达，外泌体标志物CD9和MSC标志物CD90表达显著增加（图5C,D）。第7天TEAD1-AAV组创面闭合率为47.1 ± 6.6%，显著高于Ctrl-AAV组的25.4 ± 3.0%；第14天闭合率达89.3 ± 2.5%，Ctrl-AAV组仅33.4 ± 5.3%（图5A,B）。IHC显示TEAD1-AAV组CD63、CD31和Ki67表达升高，IL-6显著降低（图5D），表明外泌体释放增加、血管生成和细胞增殖加速，炎症反应受抑。在db/db小鼠T2DM创面模型中，TEAD1-AAV组第14天创面闭合率达77.1 ± 6.3%，显著高于Ctrl-AAV组的18.6 ± 1.8%（图5E-H），CD9、CD90、CD63、CD31和Ki67表达升高，IL-6降低。蛋白质组学分析显示，T1DM模型中314个差异表达蛋白（67个上调，247个下调），上调蛋白富集于细胞外泌体、胶原细胞外基质及表皮结构成分等通路；T2DM模型中137个差异表达蛋白（73个上调，64个下调），上调蛋白涉及囊泡运输、细胞黏附、创面愈合及细胞迁移等通路。上述结果表明，TEAD1通过促进外泌体分泌并激活细胞外基质重塑、细胞运动和组织再生等通路增强创面修复，在T1DM和T2DM模型中均有效改善皮肤创面愈合。

图5. TEAD1-AAV通过增强外泌体分泌逆转1型和2型糖尿病慢性创面。（A）WT和T1DM小鼠不同处理组创面愈合过程图像（n=4）；（B）WT和T1DM小鼠不同处理组创面闭合率（n=3，mean ± SD）；（C）IF评估T1DM小鼠TEAD1-AAV或Ctrl-AAV处理第14天创面样本中TEAD1、CD90和CD9的表达，比例尺=200 µm；（D）IHC评估T1DM小鼠上述两组第14天创面样本中TEAD1、CD63、CD31、Ki67和IL-6的表达，比例尺=100 µm（n=3，mean ± SD）；（E）T2DM小鼠不同处理组创面愈合过程图像（n=3）；（F）T2DM小鼠不同处理组创面闭合率（n=3，mean ± SD）；（G）IF评估T2DM小鼠TEAD1-AAV或Ctrl-AAV处理第14天创面样本中TEAD1、CD90和CD9的表达，比例尺=200 µm；（H）IHC评估T2DM小鼠上述两组第14天创面样本中TEAD1、CD63、CD31、Ki67和IL-6的表达，比例尺=100 µm（n=3，mean ± SD）。

（6）TEAD1增强BMSC-外泌体分泌，促进神经突再生和神经修复

基于TEAD1促进ADSCs外泌体分泌的研究，进一步探究其在神经损伤修复中的治疗潜力。原代小鼠BMSCs经TEAD1过表达或敲低处理后，mRNA和蛋白水平验证效率，外泌体分离鉴定显示OE-TEAD1显著增加BMSC-Exos分泌，sh-TEAD1显著减少（图6A-C）。蛋白质组学分析显示OE-TEAD1组外泌体生物发生和分泌相关蛋白SNAP23和CD9显著上调，上调蛋白主要富集于细胞外泌体、突触、髓鞘和黏着斑等通路（图6D-F）；外泌体蛋白质组学显示仅6.6%（42/639）蛋白差异表达，上调蛋白富集于外泌体生物发生、细胞骨架、ECM-受体相互作用及突触相关通路（图6G-I）。体外实验中，OE-TEAD1 BMSC-Exos显著增强HT22小鼠海马神经元迁移能力，sh-TEAD1 BMSC-Exos无促进作用（图6J,K）；对HT22细胞蛋白质组学分析显示，OE-TEAD1 BMSC-Exos处理组上调蛋白主要涉及肌细胞细胞骨架、ECM-受体相互作用、突触后结构及化学突触传递等通路（图6L-N）。上述结果表明，TEAD1通过上调关键外泌体蛋白促进BMSC-Exos分泌，进而增强神经元迁移能力并激活受体神经细胞的细胞骨架重塑和突触再生通路，在神经再生修复中具有治疗潜力。

图6. TEAD1增强BMSC-Exos分泌并促进突起再生和神经修复。（A）评估BMSCs中TEAD1调控外泌体效应的实验设计；（B）BMSCs中TEAD1敲低和过表达后外泌体的透射电镜图像，比例尺=50 nm；（C）BMSCs中TEAD1敲低和过表达后外泌体粒径和颗粒数的统计（n=3，mean ± SD）；（D）BMSCs TEAD1过表达后的差异蛋白表达，红色表示上调蛋白，蓝色表示下调蛋白；（E）BMSCs TEAD1过表达后上调的信号通路；（F）OE-TEAD1和OE-Ctrl组差异表达蛋白热图，展示髓鞘、突触、黏着斑和细胞外泌体相关蛋白的表达（n=3）；（G）OE-TEAD1 BMSCs-exos和OE-Ctrl BMSCs-exos组差异蛋白表达，红色表示上调蛋白，蓝色表示下调蛋白；（H）OE-TEAD1 BMSCs-exos组上调的信号通路；（I）OE-TEAD1 BMSCs-exos（n=4）和OE-Ctrl BMSCs-exos（n=5）差异表达蛋白热图，展示肌细胞细胞骨架、ECM-受体相互作用和突触相关蛋白的表达；（J）Transwell实验显示不同来源外泌体对HT22细胞迁移的影响（n=3，mean ± SD）；（K）不同来源外泌体处理HT22细胞的划痕实验结果，比例尺=200 µm（n=3，mean ± SD）；（L）OE-TEAD1 BMSCs-exos或OE-Ctrl BMSCs-exos处理的HT22细胞差异蛋白表达，红色表示上调蛋白，蓝色表示下调蛋白；（M）OE-TEAD1 BMSCs-exos处理的HT22细胞中上调的信号通路；（N）OE-TEAD1 BMSCs-exos或OE-Ctrl BMSCs-exos处理的HT22细胞差异表达蛋白热图，展示肌细胞细胞骨架、胶原细胞外基质、细胞突起、突触后结构、化学突触传递和ECM-受体相互作用相关蛋白的表达（n=3）。

（7）TEAD1-AAV疗法增强外泌体分泌并促进脊髓损伤后的功能恢复

在C57小鼠T13胸椎完全横断SCI模型中，损伤后1天于病灶局部注射TEAD1-AAV、Ctrl-AAV、TEAD1-AAV+GW4869或Ctrl-AAV+GW4869（图7A）。IF分析证实脊髓组织TEAD1成功转导表达，TEAD1-AAV组外泌体标志物CD63和神经元标志物NeuN及MSC标志物CD90表达增强；GW4869共处理显著降低CD63和NeuN表达，阻断TEAD1驱动的神经再生（图7B,C）。

术后8周运动功能评估显示，TreadScan步态分析表明TEAD1-AAV组步幅长度增加、后肢协调性改善（图7D,F）。BMS评分在术后1、2、4、6、8周均显著高于对照组，第8周TEAD1-AAV组中位数达6.5分（频繁足掌 stepping伴偶发协调），Ctrl-AAV组为3.0分（主要背侧 stepping无足掌支撑），TEAD1-AAV+GW4869组为3.2分（图7G）。足印分析显示TEAD1-AAV组平均足旋转角度为45.29°，显著高于Ctrl-AAV组（9.98°）、TEAD1-AAV+GW4869组（4.07°）和Ctrl-AAV+GW4869组（4.44°）（图7H）。后肢拖拽比例方面，Sham组为0%，Ctrl-AAV组为89.24%，TEAD1-AAV组降至36.1%，而TEAD1-AAV+GW4869组为93.82%，与Ctrl-AAV组相当（图7I,J）。上述结果表明，TEAD1-AAV通过促进外泌体分泌和神经元再生，在完全SCI模型中实现显著的运动功能恢复，且该效应依赖于外泌体分泌。

图7. TEAD1-AAV治疗增强外泌体分泌并促进SCI后功能恢复。（A）C57小鼠SCI模型建立及相应蛋白质组学分析；（B,C）SCI后第4周和第8周IF染色（B）及NeuN损伤比例（C），NeuN（红色）、TEAD1（绿色）、CD90（橙色）、CD63（紫色）和DAPI（蓝色），比例尺=2 mm（n=3，mean ± SD）；（D）Sham、Ctrl-AAV、Ctrl-AAV+GW4869、TEAD1-AAV和TEAD1-AAV+GW4869组小鼠术后第8周TreadScan测试典型图谱；（E,F）上述五组小鼠术后第8周左后肢（E）和右后肢（F）足印长度（n=5，mean ± SD）；（G）上述五组小鼠运动功能BMS评分（n=5，mean ± SD）；（H）上述五组小鼠术后第8周足旋转角度（n=5，mean ± SD）；（I）上述五组小鼠术后第8周后肢拖拽比例（n=5，mean ± SD）；（J）上述五组小鼠术后第8周拖拽时间（n=5，mean ± SD）。